Informacja

Kiedy należy stosować inhibitory endocytozy w testach wiązania komórek?

Kiedy należy stosować inhibitory endocytozy w testach wiązania komórek?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Zaczynam robić testy wiązania komórek i chciałbym, żeby moje białka nie były endocytozowane przez komórki ssaków. Typowe sugestie dotyczą przechowywania komórek na lodzie, a eksperyment wiązania ma miejsce również wtedy, gdy komórki są schłodzone.

Jednak dla pewności zasugerowano, że stosuję inhibitory endocytozy. Więc moje pytania brzmią, kiedy konieczne są inhibitory endocytozy? Skąd mam wiedzieć, że inhibitory endocytozy są konieczne? Które z nich faktycznie bym użył?

Zdaję sobie sprawę, że istnieją zarówno klatrynowy, jak i nieklatrynowy mechanizm internalizacji. Który mechanizm byłby bardziej przydatny do badania interakcji przeciwciało-receptor?


Jak w przypadku wielu rzeczy, to zależy. Poza tym, nie jestem pewien, kiedy mówisz o interakcji przeciwciało-receptor, czy masz na myśli, że masz przeciwciało, które jest specyficzne dla receptora, czy też badasz receptory Fc wiążące się z przeciwciałami? (dla poniższych zakładam, że to pierwsze)

W przypadku większości typów komórek i większości cząsteczek powierzchniowych proste wiązanie przeciwciała nie wywoła endocytozy, a trzymanie komórek na lodzie wystarcza, aby zapobiec większości endocytozy w tle (testy wykonywałbym również w chłodni, aby nawet kiedy wyjmiesz probówki z pojemnika na lód, pozostają zimne).

Z drugiej strony, jeśli używasz wysoce fagocytujących komórek (takich jak makrofagi) i/lub wyzwalasz receptor poprzez sieciowanie lub inny mechanizm, możesz uzyskać endocytozę, która wpływa na twoje wyniki.

Mechanizm (klatryna vs nie) również może się różnić, ponownie w zależności od tego, co jest powiązane.

Powinieneś przeprowadzić pewną optymalizację - tj.: wykonaj ten sam test na zestawie próbek, z hamowaniem lub bez i sprawdź, czy ma to wpływ na wiązanie przeciwciała. Ale pamiętaj, że wiele leków hamujących endocytozę może również działać na inne rzeczy, więc uważaj na artefakty. Może przeczytaj to: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18369934


Obejrzyj wideo: SpectraSensors TDLAS Gas Analyzer: Best-in-Class Moisture Analyzer (Październik 2022).